第57卷第1期河南农业大学学报Vol．57No．12023年2月JournalofHenanAgriculturalUniversityFeb．2023收稿日期:2022－01－11基金项目:广东省现代农业产业技术体系南方现代草牧业产业项目(2019K127)作者简介:焦豪杰(1995—)，男，河南焦作人，硕士研究生，主要从事动物营养与免疫的研究。通信作者:刘铀(1966—)，男，湖南湘潭人，教授，博士。引用:焦豪杰，陈绍红，刘铀．异绿原酸A体外抗小反刍兽疫病毒活性及其作用机制研究［J］．河南农业大学学报，2023，57(1):125－135．DOI:10．16445/j．cnki．1000－2340．20220329．001异绿原酸A体外抗小反刍兽疫病毒活性及其作用机制研究焦豪杰1，陈绍红2，刘铀2(1．广东海洋大学滨海农业学院，广东湛江524088;2．广东海洋大学食品科技学院，广东湛江524088)摘要:【目的】研究异绿原酸A(isochlorogenicacidA，IAA)体外抗小反刍兽疫病毒(pestedespetitsruminantvirus，PPＲV)的效果及其作用机制。【方法】采用MTT法测定IAA对非洲绿猴肾细胞(verdareno，Vero)的最大无毒质量浓度、半数细胞毒性质量浓度(50%cytotoxicmassconcentration，CC50);空斑形成试验测定IAA的半数有效质量浓度(medianeffectmassconcentration，EC50)并计算治疗指数(therapeuticindex，TI);MTT法观察IAA对PPＲV感染的Vero细胞活性的影响;采用空斑形成试验、实时荧光定量PCＲ(quantitativereal-timePCＲ，qＲT－PCＲ)、免疫印迹试验和间接免疫荧光试验观察IAA对PPＲV增殖和分布的影响;采用活性氧(reactiveoxygenspecies，ＲOS)荧光探针、硫代巴比妥酸(thiobarbituricacid，TBA)比色法和羟胺比色法分别检测IAA对PPＲV感染细胞内ＲOS、丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活性的影响;采用免疫印迹试验检测IAA对PPＲV感染细胞中磷脂酰肌醇3－激酶(phosphatidylinositol3－kinase，PI3K)、蛋白激酶B(proteinkinaseB，AKT)、磷酸化AKT(p－AKT)、B细胞淋巴瘤－2蛋白(Bcelllymphoma－2protein，Bcl－2)和Bcl－2相关X蛋白(Bcl－2associatedXprotein，Bax)表达水平的影响。【结果】IAA对Vero细胞的最大无毒质量浓度、CC50、EC50分别为7．81、125．60、21．02mg·L－1，TI值为5．98;IAA处理能显著抑制PPＲV诱导的细胞病变及病毒在Vero细胞中的增殖;细胞活力显著高于病毒感染细胞;病毒噬斑形成数量、病毒F和N基因表达水平显著降低;宿主细胞胞浆内病毒分布显著减少。IAA能显著提高PPＲV感染细胞SOD活性，清除病...
