第４６卷第２期２０２３年２月合肥工业大学学报（自然科学版）ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＨＥＦＥＩＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（ＮＡＴＵＲＡＬＳＣＩＥＮＣＥ）Ｖｏｌ．４６Ｎｏ．２Ｆｅｂ．２０２３收稿日期：２０２１－０３－２２；修回日期：２０２１－０４－２５基金项目：国家自然科学基金资助项目（３１４６１１４３００８）；农业农村部农业资源环境保护资助项目（１２５Ａ０６０５）和徐州医科大学开放基金资助项目（ＸＹＫＦ２０２１０４）作者简介：张真真（１９９３—），女，河南周口人，合肥工业大学硕士生；黄胜雄（１９８３—），男，四川眉山人，博士，合肥工业大学副教授，硕士生导师，通信作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｓｘ９２６＠ｈｆｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ．ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００３－５０６０．２０２３．０２．０１８扩展青霉菌实时定量ＰＣＲ内参基因挖掘与应用张真真１，蒋礼玲２，李婉炘１，王谨凡１，贾举庆３，黄胜雄１（１．合肥工业大学食品与生物工程学院，安徽合肥２３０６０１；２．青海大学农林科学院，青海西宁８１００１６；３．山西农业大学农学院，山西晋中０３０８０１）摘要：实时定量聚合酶链式反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术因其高效且便捷的特点在基因表达检测中被广泛应用。实时定量ＰＣＲ结果数据处理策略之一是使用内参基因进行基因表达数据的标准化。文章基于扩展青霉菌孢子不同生长阶段的ＲＮＡ－ｓｅｑ数据，挖掘和注释了６９４个稳定表达的候选内参基因；随机挑选出Ｋｎｒ４、Ｉｓｙ１、Ｓｐｔ５、Ｎｕｃｂ、Ｈｐ１、Ｈｐ２、Ｗｈｔｈ、Ｈｐ３、Ｇｐｈ３、Ｐｗｉ、Ｔａｆ４、Ｈｐ４、Ａｓｙ、ＧＴＰａｓｅ在内的１４个基因，以４、２５℃条件下ＰＤＢ培养基生长６、１２、２４、３６ｈ的扩展青霉菌为材料，进行实时定量ＰＣＲ实验。实时定量ＰＣＲ数据基于ｇｅＮｏｒｍ和ＮｏｒｍＦｉｎｄｅｒ２种软件的综合分析，表明Ｉｓｙ１、Ｓｐｔ５、Ｎｕｃｂ、Ｈｐ１适合作为内参基因。以Ｉｓｙ１和Ｓｐｔ５分别作为内参基因，检测Ｇｈ３０基因在４、２５℃条件下扩展青霉菌生长发育过程中的基因表达，显示出一致的基因表达水平，进一步验证了挖掘得到的内参基因的可靠性。该研究为扩展青霉菌的分子生物学研究提供了优良的内参基因，同时提供了一种高效的内参基因的挖掘和鉴定方法。关键词：内参基因；扩展青霉菌；ＲＮＡ－ｓｅｑ数据...
