中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1151.1一2002对虾Taura综合征病毒(Tsv)逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)诊断方法Testmethodofreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT-PCR)fortuarasyndromevirus(TSV)2002一11一25发布2003一05一01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布SN/T1151.1-2002目q台本标准的附录A是资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本标准主要起草人:江育林、高隆英、刘鱿、史秀杰。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。SN/T1151.1-2002对虾Taura综合征病毒(TSV)逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)诊断方法范围本标准规定了用聚合酶链式反应技术检测对虾Taura综合征病毒的方法。本标准适用于对虾Taura综合征病毒的鉴定及本病的流行病学调查、诊断、检疫和监测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法(eqvISO3696:1987)33.13.23.33.43.53.6试剂和材料水应符合GB/T668Z-1992中一级水的规格。Taq酶-20℃保存不要反复冻融或温度剧烈变化。逆转录酶AMV-20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。RNA抑制剂又RNasin)一20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。dNTP《含dCTP,dGTP,dATP,dTTP各10mmol/L)引物浓度为40pmol/I。其序列如下:上游引物TSVF:S'-TCAATGAGAGCTTGGTCC-3'下游引物TSVR:5’一AAG丁AGACAGCCGCGCT丁一3'异丙醇分析纯，使用前预冷到一20"C,矿物油要求无DNA酶和RNA酶。剪刀、镊子器材和设备PCR扩增仪电泳仪微量移液器及吸头紫外观察灯恒温培养箱普通冰箱和低温冰箱，尹口UO户工JQ以qJ月马4.14.24.34.44.54.6SN/T1151.1-20024.7电动匀浆器4.8离心机和离心管5Taura综合征病毒核酸的鉴定51采样取活虾，或取头部放在95%的酒精中(可以在常温下保存30d)，但样品处理前须让酒精完全挥发。取约50mg-100mg的鳃丝(或者附肢、上皮、血淋巴)，放在1.5mL的离心管中。5.2样品处理应在10℃以下进行先加人150pLCTAB(见附录A.1)溶液，用小剪刀剪碎后，用电搅拌器将样品匀浆成糊状。再加CTAB溶液到900pL,混匀后于25℃作用2h5.3RNA抽提在含有样品的离心管中加...
