ICS65．020．01B16囝圄中华人民共和国国家标准GB／T28081—2011烟草环斑病毒检疫鉴定方法Detectionandidentificationoftobaccoringspotvirus2011-12-30发布2012-06-01实施宰瞀鬻鬻瓣警糌瞥翼发布中国国家标准化管理委员会厘111刖罱GB／T28081--20”本标准按照GB／T1．1—2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC／TC271)提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。本标准主要起草人：陈青、林石明、杨翠云、张毅、陈红运、廖富荣、郑云、李斌。1范围烟草环斑病毒检疫鉴定方法GB／T28081—2011本标准规定了烟草环斑病毒检疫鉴定的基本原则和方法。本标准适用于可能携带烟草环斑病毒的种子、苗木、鳞球茎、组培苗等繁殖材料及其产品的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文侔。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN／T1146植物检疫烟草环斑病毒检疫鉴定方法。3烟草环斑病毒基本信息中文名：烟草环斑病毒。学名：tobaccoringspotvirus。缩写：TRSV。属豇豆花叶病毒科Comoviridae，线虫传多面体病毒属Nepovirus病毒。TRSV的传播途径多样，可以通过种子、嫁接、机械接种和介体传播。烟草环斑病毒其他信息参见附录A。4方法原理利用基于抗原抗体反应的双抗夹心酶联免疫吸附测定(DAS-ELISA)、体外反转录和体外DNA合成技术的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)进行检测鉴定。5仪器设备、用具及试剂5．1仪器设备洗板机、酶联检测仪、高速冷冻离心机、电子天平(感量0．001g)、超净工作台、旋涡混合仪、PCR仪、实时荧光PCR仪、电泳仪、电泳槽、紫外透射仪、榨汁机、水浴锅。5．2用具微量移液器(O．5pL，2pL，10pL，20pL，100pL，200pL，1000弘L)、化学PCR反应管和(或)96孔光化学PCR反应板、酶联板、研钵。5．3试剂双抗体夹心酶联免疫吸附测定试剂(见B．1)。】GB／T28081—2011反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测试剂(见C．1)。实时荧光RT-PCR检测试剂(见D．1)。Ic_RT-PCR检测试剂(见E．1)。6种苗的检测鉴定6．1种子检测鉴定挑取500粒种子(重点挑取畸形、不成熟的种子)播于灭菌土中，待长出3片～4片叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植株分组(10株为1组)并编号。采集的叶片分成两份，...
