GB/T18653-2002前言本标准是依据加拿大国家动物疾病研究所的实验室操作规程，结合本国实际情况制定的，通过大量试验，证实该方法准确可靠。本标准的附录A是标准的附录，附录B是提示的附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:天津动植物检疫局。本标准主要起草人:秦贞奎、侯艳梅、张碧波。中华人民共和国国家标准胎JL弯曲杆菌的分离鉴定方法GB/T18653-2002Methodsforisolationandidentificationofcampylobactorfetus1范围本标准规定了胎儿弯曲杆菌的分离鉴定方法本标准适用于牛、绵羊、冷冻精液胎儿弯曲杆菌的检验，其他动物可参照使用2胎儿弯曲杆菌的分离鉴定2.1设备和材料2.1门混合气体[质量比为3.5%氧(00,10%二氧化碳(C02),86.5%氮(N,)口。2.1.2厌氧培养罐。2.1.3采样棒及吸球2.1.42mL注射器，5号针头，20号针头。2.1.5灭菌青霉素瓶及生理盐水。2.1.6供常规细菌分离鉴定用的基本设备与材料。2.2培养基和试剂〔见附录A(标准的附录)〕。2.2,1增菌运输培养基(TEM)o2.2.2半胧氨酸牛心浸膏培养基(CH),2.2.3琼脂培养基(MH),2.2-4疏基乙酸盐肉汤。2.2.5相关生化试剂。2.3胎儿弯曲杆菌的分离鉴定程序见附录B(提示的附录)示意图。2.4分离培养2.4.1样品采集2.4-1-，母牛站立或六柱栏保定，用5%来苏儿消毒牛的外阴部，将采样棒的采样端插人阴道，压扁另一端的吸球，并来回抽动，吸取阴道粘液。取出采样棒后，插人盛有3mI灭菌生理盐水的小瓶中吹吸数次，再将采样棒放人消毒液中。2.4.1.2公牛六柱栏保定，用绳子固定采样侧的后肢，剪短阴筒外部的阴毛，用5%的来苏儿消毒公牛的尿道口，将采样棒的采样端插人阴筒内，将另一端的吸球压扁并来回抽动，吸取包皮液。取出采样棒迅速插人盛有3ml灭菌生理盐水的小瓶中吹吸数次。2.4.1.3样品液静置1min-2min，用灭菌注射器吸取上清液2mL，分别注人两瓶增菌运输培养基(见附录A中A1)中，每瓶1mL。振荡混匀，尽快送至实验室。2.4-1.4取样品做革兰氏染色并做湿涂片镜检。也可用棉拭子荫取样品液直接涂布于含抗菌素的MH(见附录A中A3)或CH(见附录A中A2)琼脂平板上。2.4.2已接种样品的增菌运输培养基置37'C培养72h。用直径3mm的接种环将增菌液分别划线于两个MH或CH平板培养基上，将平板放置厌氧培养罐中，将雄内空气抽出，达到一5.5kPa时停止，充中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2002一02一19批准2002-05一01实施Gs/T18653-2002人经0.22pm滤膜过滤的混合气体...
