ICS65.020.01B46备案号：18651-2006江苏省地方标准DB32/T906—2006动物饲料和饮用水中己烯雌酚的测定酶联免疫法DeterminationofDiethylstilbestrolinanimalfeedingstuffsandwaterbyELISA2006-03-25发布2006-05-25实施江苏省质量技术监督局发布DB32DB32/T906—2006前言为了加强对己烯雌酚的有效监控，进一步规范畜禽养殖中投入品的管理，特制定本标准，以从源头上监控己烯雌酚的非法使用，从而保证畜产品的安全和人民身体健康。本标准按照GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T1.2-2000《标准化工作导则第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》编写。本标准由江苏省农林厅提出。本标准起草单位：江苏省饲料监察所。本标准主要起草人：耿士伟、时勇、邵德佳、毕昊容、冯三令、储瑞武、贾书静。DB32/T906—20061动物饲料和饮用水中己烯雌酚的测定酶联免疫法1范围本标准规定了动物饲料和饮用水中己烯雌酚（DES）酶联免疫法测定的原理、试剂和材料、仪器、试样分析、允许差。本标准适用于酶联免疫法测定动物饲料和饮用水中己烯雌酚的量。方法最低检出限为5μg/kg。2原理测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有针对兔IgG（己烯雌酚抗体，简称DES抗体）的羊抗体。加入DES抗体，标准或样品溶液。己烯雌酚与DES抗体连接，同时DES抗体也与羊抗体连接。洗涤步骤后，加入DES酶标记物，DES酶标记物与孔中的未结合的（空位）DES抗体连接，然后在洗涤步骤除去未结合的DES酶标记物。将酶基质和发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中并且孵育。结合的DES酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450nm处测量，吸收光强度与样品中的DES浓度成反比。3试剂和材料3.1甲醇，分析纯。3.2滤纸，定性滤纸。3.380%甲醇水溶液：量取80mL甲醇，加入蒸馏水至100mL。3.440%甲醇水溶液：量取40mL甲醇，加入蒸馏水至100mL。4仪器4.1恒温培养箱。4.2粉碎机。4.3振荡器。4.4酶标仪。4.5微量移液枪：单道1mL～5mL可调、10μL～100μL可调和多道50μL～250μL可调。5试样分析5.1样品提取5.1.1饲料称取2.0g粉碎后的饲料于50mL离心管中，加入80%甲醇水溶液20mL于振荡器上振荡3min，滤纸过滤后取滤液1mL，加入1mL蒸馏水稀释。取稀释液1mL，加入40%甲醇水溶液9mL，摇匀，供酶联免疫吸附测定用。5.1.2饮用水直接量取1mL，加入40%甲醇水溶液4mL，摇匀，供酶联免疫吸附测定用。5.2测定使用前将试剂盒及处理后的试...
