ICS67.050X04备案号：37940-2013DB22吉林省地方标准DB22/T1821—2013粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的PCR检测Detectionoftrichothecenes-producingfungiingrainsbyPCRmethod2013-05-15发布2013-09-01实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1821—2013I前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。本标准主要起草人：史艳宇、华蕾、刘金华、王莹、李媛媛、初真林、王伟、刘静秋、周亮、王潇、刘晓晖、王颖、任明月。本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1821—20131粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的PCR检测1范围本标准规定了粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的PCR检验方法。本标准适用于粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的快速筛选。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.15食品微生物学检验霉菌和酵母计数GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求WS/T230临床诊断中聚合酶链式反应（PCR）技术的应用3原理单端孢霉烯前体（trichodiene）合成酶是催化所有真菌单端孢霉烯族化合物合成反应第一步的酶类。根据该生化合成过程中的关键基因：单端孢霉烯前体合成酶编码基因tri5的有无来判断待检样品是否污染了产单端孢霉烯族化合物的真菌。4试剂和材料除特别说明以外，所用试剂为分析纯或生化试剂。4.1水：应符合GB/T6682中一级水的规格。4.2马铃薯-葡萄糖-琼脂（Potatodextroseagar，PDA）：按GB4789.15规定。4.3CTAB缓冲液：55mmol/LCTAB、1400mmol/L氯化钠（NaCl）、20mmol/LEDTA、100mmol/LTris，用10%盐酸（HCl）调pH至8.0，121℃高压灭菌20min，储存于2℃~8℃。4.4TE缓冲液：10mmol/LTris、150mmol/L氯化钠（NaCl）、2mmol/LEDTA、1%十二烷基磺酸钠，用10%盐酸（HCl）调pH至8.0，121℃高压灭菌20min，储存于2℃~8℃备用。4.5RNA酶溶液（5μg/μL）。4.6蛋白酶K（20mg/mL)。4.7Tris饱和酚。4.8酚：三氯甲烷：异戊醇（25：24：1）；三...
