ICS65.020.30B41DB41河南省地方标准DB41/T1515—2017猪乙型脑炎病毒RT-PCR检测方法2017-12-06发布2018-03-06河南省质量技术监督局发布河南省地方标准公共服务平台DB41/T1515—2017I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由河南省畜牧局归口。本标准起草单位：河南省动物疫病预防控制中心，郑州市畜牧技术推广站，焦作市动物疫病预防控制中心,驻马店市动物疫病预防控制中心、开封市动物卫生监督所、郑州市中心医院。本标准主要起草人：崔沛、班付国、闫若潜、曹伟伟、马震原、陈悦、王淑娟。本标准参加起草人：王英华、谢彩华、王翠、王华俊、赵胜杰、赵明军、王东方、郭育培、张敏、杨晴、张煜、刘先敏、靳冬、刘淑敏。河南省地方标准公共服务平台DB41/T1515—20171猪乙型脑炎病毒RT-PCR检测方法1范围规定了猪乙型脑炎病毒RT-PCR检测的试剂和仪器设备,样品采集、处理、存及运输,操作方法、结果判定。适用于对疑似猪乙型脑炎病毒感染的脑组织、血液，精液，流产胎儿、死胎、木乃伊胎等样品中病毒核酸的检测。2试剂和仪器设备2.1试剂2.1.1除另有规定外，所用生化试剂均为分析纯。提取RNA所用试剂应使用无RNA酶污染的容器进行分装。2.1.2组织悬液（见附录A），-20℃保存。2.1.3裂解液（TriZol），氯仿，1×核酸电泳缓冲液，0.01mol/L（pH7.2）的PBS（见附录A），DEPC处理水（见附录A），以上试剂4℃保存。2.1.4组织样品悬液常规试剂（见附录A）常温保存。2.1.5裂解液（TriZol），氯仿，0.01mol/L（pH7.2）PBS（见附录A），DEPC水（二乙基焦碳酸酯处理的水），均应2℃-8℃保存。2.1.6异丙醇，75%乙醇，应-20℃保存。2.1.7阳性对照样品、阴性对照样品见附录A。2.1.8RT-PCR扩增用上、下游引物序列见附录B。2.1.9猪乙型脑炎病毒RT-PCR试验反应混合液组成、说明及使用注意事项参见附录C。2.2仪器设备PCR扩增仪，高速冷冻离心机（离心转速在12000r•min-1以上），核酸电泳仪和水平电泳槽，恒温水浴锅，生物安全柜，组织匀浆器，2℃～8℃冰箱，-70℃冰箱，单道微量移液器（0.1µL～2.5µL；0.5µL～10µL；2µL～20µL；20µL～200µL；100µL～1000µL）凝胶成像系统(或紫外透射仪)，真空干燥器。3样品的采集、处理、存放及运输3.1样品的采集河南省地方标准公共服务平台DB41/T1515—201723.1.1采取疑似猪乙型脑炎病毒感染的脑组织、流产胎儿、死胎、木乃伊胎及公猪精液等靶组织样品，装入灭菌1.5mL离心管中，编号，送实验室。3.2样品的处理3.2.1...
