ICS11.220B41MA团体标准T/CVMA12—2018猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR检测方法Real-TimeRT-PCRfordetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus2018-10-24发布2018-10-24实施中国兽医协会发布T/CVMA12—2018I前言本标准按GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由中国兽医协会提出并归口。本标准起草单位：中国动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：周智、王传彬、杨林、吴佳俊、宋晓晖、翟新验、倪建强、刘玉良、张硕、刘颖昳、赵柏林、顾小雪、曲萍。T/CVMA12—20181猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR检测方法1范围本标准规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）通用型实时荧光RT-PCR诊断技术、鉴别美洲型和欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR诊断技术。本标准主要用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T25172猪常温精液生产与保育技术规范NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范执行3试剂与耗材3.1RNA提取试剂RNA提取试剂详见附录A，或选取商品化的病毒RNA提取试剂盒。3.2其他试剂TaqDNA聚合酶（5U/µL），PrimeScriptTMRTMixⅡ反转录酶混合物，50×ROXReferenceDyeⅡ,2×OneStepRT-PCRBufferⅢ缓冲液，无水乙醇，无菌无核酸酶水，生理盐水。3.3引物探针3.3.1猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）通用型实时荧光RT-PCR引物和探针，见表1。表1猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）通用型实时荧光RT-PCR引物和探针序列名称序列（5＇-3＇）美洲型上游引物（NAF）TGGARATTCATCACCTCCAGR美洲型下游引物（NAR）GTGCCGTTRACCGTAGTGGA欧洲型上游引物（EUF）ACTTCCAGATGCAGATTGTGT欧洲型下游引物（EUR）GCCGTTCACTGATGTTAGTCC探针FAM-TACATTCTGGCCCCTGCCCAYCA-BHQ注：将表中引物和探针用无菌无核酸酶水稀释至10pmol/µL后使用。3.3.2美洲型和欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒双重实时荧光RT-PCR引物和探针,见表2。表2美洲型和欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒双重实时荧光RT-PCR引物和探针序列T/CVMA12—20182名称序列（5＇-3＇）美洲型和欧洲型上游引物（NAF-EUF）CGCCAGCCAGTCAATCARC美洲型和欧洲型下游引物（NAR-EUR）GRGGAAAATGKGGCTTCTCMG欧洲型探针FAM-TCCTCCCCTRGGTTGCTGGCGCT-BHQ美...
