ICS65.020.01B16DB12天津市地方标准DB12/T1006—2020茄子黄萎病菌土壤带菌PCR检测技术规程TechnicalregulationofPCRdetectionforverticilliumdahliaeinsoil2020-12-17发布2021-01-16实施天津市市场监督管理委员会发布DB12/T1006—2020I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。本标准起草单位：天津市植物保护研究所。本标准主要起草人：高苇、王勇、杨利娟、贲海燕、张春祥、刘晓琳、姚玉荣、王万立。DB12/T1006—20201茄子黄萎病菌土壤带菌PCR检测技术规程1范围本标准规定了茄子黄萎病菌的PCR检测的仪器和试剂、土壤取样、PCR检测、结果判定、土样及资料保存。本标准适用于土壤中茄子黄萎病菌的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修订版）均适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T36197-2018土壤质量土壤采样技术指南GB/T36199-2018土壤质量土壤采样程序设计指南3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1茄子黄萎病菌verticilliumwiltofeggplant茄子黄萎病菌大丽轮枝菌（VerticilliumdahliaKleb.）可以侵染多种植物引起一种土传的维管束病害，病菌可在土壤中长期存活，是茄果类作物生产中危害最为严重的土传病害。茄子黄萎病菌的基本信息参见附录A。3.2微菌核verticilliumwiltofeggplant茄子黄萎病菌生长过程中，一条或多条菌丝体膨大、细胞壁增厚后，多向芽殖而形成的多细胞结构，该结构为肉眼可见的黑色菌丝颗粒。3.3土壤带菌soil-borne土壤中携带能够诱发侵染植株发病的病原菌。4仪器和试剂4.1主要仪器涡旋振荡仪、高压灭菌锅、高速冷冻离心机、聚合酶链式反应仪（PCR仪）、水浴锅、电子天平（感量0.1g和0.1mg）、电泳仪、凝胶成像仪。4.2主要试剂DB12/T1006—20202水饱和酚、三氯甲烷、液氮、异丙醇、无水乙醇、DNA荧光染料（GelRed）、Tris-HCl等。DNA分子量标准（DNAMarker，能够区分100bp～1000bp的DNA片段）。十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）抽提液：2%CTAB，100mmol/LTris·Cl（pH8.0），20mmol/LEDTA（pH8.0），1.4mol/L氯化钠。PCR反应混合物：2×MasterMix:TaqDNA聚合酶，2×PCR反应缓冲液，dNTP混合物等。10×TAE电泳缓冲液：242gTris-base，57.1mL冰乙酸，100mL0.5mol/LEDTA（pH8.0）加蒸馏水至1000mL，使用时稀释10倍。除另有规定外，...
