ICS65.020.01CCSB3115内蒙古自治区地方标准DB15/T2855—2023马铃薯腐烂茎线虫的qPCR检测技术规程CodeofpracticeforqPCRdetectionofditylenchusdestructor2023-01-28发布2023-02-28实施内蒙古自治区市场监督管理局发布DB15/T2855—2023I前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、中国农业大学、鄂尔多斯市农牧技术推广中心、内蒙古自治区农牧业技术推广中心、鄂托克前旗农牧业技术推广中心。本文件主要起草人：席先梅、张力群、霍宏丽、陈伟、苗春乐、融晓君、路奇、尤俊文、张晓霞、贺小勇、孔庆全、张冬梅、田晓燕。DB15/T2855—20231马铃薯腐烂茎线虫的qPCR检测技术规程1范围本文件规定了利用qPCR检测技术对马铃薯腐烂茎线虫检测的试剂、仪器、样品处理、DNA提取、结果记录和样品保存等内容。本文件适用于土壤和马铃薯植物样品中腐烂茎线虫的qPCR检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T1121.1土壤检测第1部分：土壤样品的采集、处理和储存3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。腐烂茎线虫ditylenchusdestructor腐烂茎线虫属于线虫门（Nematoda）、侧尾腺纲（Secernrntea）、垫刃目（Tylenchida）、粒科（Anguinidae）、茎线虫属（Ditylenchus），是危害马铃薯的重要病原线虫，可引起马铃薯叶片黄化、萎蔫、块茎干腐等症状，导致减产和品质降低。参见附录A。定量PCRquantitativePCR定量PCR技术（quantitativePCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入可与靶标DNA结合的荧光基团，依据荧光信号的强度对扩增产物进行实时监测，从而实现对初始靶标DNA模板量进行定量分析的技术。根据荧光信号来源可分为染料法和探针法。4试剂和仪器试剂4.1.1除特别规定外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中相关规定。4.1.2土壤提取缓冲液：1MTris-HCl，0.1MEDTA，1.5MNaCl，2%CTAB，0.1MNaH2PO4/Na2HPO4，pH=8.0。DB15/T2855—202324.1.3CTAB缓冲液：2%CTAB，1.4MNaCl，0.1MTris-HCl，0.02MEDTA，pH=8.0。E缓冲液：10mMTris-HCl...
