ICS07.100C04备案号：54240-2017DB22吉林省地方标准DB22/T2563—2016甲型H1N1流感病毒核酸检测Real-timePCR法Real-timePCRmethodforthedetectionofH1N1Influenzavirusnucleicacid2016-12-09发布2017-03-01实施吉林省质量技术监督局发布DB22/T2563—2016I前言本标准根据GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。本标准由吉林省卫生和计划生育委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林省疾病预防控制中心。本标准主要起草人：柳鸿敏、李静、吴东林、臧希卉。DB22/T2563—20161甲型H1N1流感病毒核酸检测Real-timePCR法警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验，本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。1范围本标准规定了甲型H1N1流感病毒核酸检测Real-timePCR法。本标准适用于甲型H1N1流感病毒核酸进行检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489-2008实验室生物安全通用要求WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链式反应（PCR）技术的应用WS285-2008流行性感冒诊断标准3试剂与材料3.1试剂3.1.1水：无菌RNaseFreeWater3.1.2RNA提取试剂：RNA提取试剂盒3.1.3一步法反应试剂盒3.1.4病毒采样液：内带拭子3.2阳性对照和阴性对照3.2.1阳性对照：甲型H1N1流感病毒毒株提取的核酸，且稀释至Ct值在20～30之间3.2.2阴性对照：无菌RNaseFreeWater3.3引物及探针3.3.1流感病毒A型特异性引物及探针a)FluA-Forward：5’-GACCRATCCTGTCACCTCTGAC-3’b)FluA-Reverse：5’-GGGCATTYTGGACAAAKCGTCTACG-3’c)FluA-probe：FAM5’-TGCAGTCCTCGCTCACTGGGCACG-3’BHQ13.3.2甲型H1N1流感病毒特异性引物及探针DB22/T2563—20162a)SWH1-Forward：5’-GGGTAGCCCCATTGCAT-3’b)SWH1-Reverse：5’-AGAGTGATTCACACTCTGGATTTC-3’c)SWH1-Probe：FAM5’-TGGGTAAATGTAACATTGCTGGCTGG-3’BHQ14仪器和设备4.1漩涡振荡器4.2Real-timePCR仪：配相应的反应管4.3高速离心机：8000rpm～12000rpm4.4冷藏冰箱：2℃～8℃4.5冷冻冰箱：-20℃4.6生物安全柜：CLASS-Ⅱ型4.7微量移液器：10μL，100μL，200μL，1000μL5试验步骤5.1标本5.1.1鼻拭子将拭子（3.1.4）平行于上颚插入鼻孔，旋转，保持数秒，待拭子头吸收分泌物以后，缓慢转动退出。将拭子头浸入病...
