ICS11.220CCSB41DB22吉林省地方标准DB22/T3283—2021猪血凝性脑脊髓炎病毒检测TaqMan荧光定量PCR法TaqManquantitativePCRassayfordetectionofporcinehemagglutinatingencephalomyelitisvirus2021-11-26发布2021-12-15实施吉林省市场监督管理厅发布DB22/T3283—2021I前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由吉林省畜牧业管理局提出并归口。本文件起草单位：吉林大学。本文件主要起草人：贺文琦、李姿、兰云刚、赵魁、关继羽、陆慧君、高丰。DB22/T3283—20211猪血凝性脑脊髓炎病毒检测TaqMan荧光定量PCR法1范围本文件描述了猪血凝性脑脊髓炎病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的原理、试验条件、试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤和结果判定。本文件适用于猪血凝性脑脊髓炎病毒的检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1猪血凝性脑脊髓炎病毒porcinehemagglutinatingencephalomyelitisvirus，PHEV引起猪血凝性脑脊髓炎的病原。PHEV为不分段的单股正链RNA病毒，属于冠状病毒科（Coronaviridae）、β冠状病毒属（Betacoronavirus）成员。4原理根据PHEVS基因序列设计引物和探针，探针在5’端标记FAM荧光素作为报告荧光基团，3’端标记TAMRA作为淬灭荧光基团。反应进入退火阶段时，引物和探针同时与目的基因片段结合，此时探针上荧光基团发出的荧光信号被淬灭基团所吸收，仪器检测不到荧光信号；而反应进行到延伸阶段时，Taq酶发挥5’→3’的外切核酸酶功能，将探针降解。探针上的荧光基团游离出来，所发出的荧光不再为淬灭基团所吸收而被检测仪所接收。随着PCR反应的循环往复，PCR产物呈指数形式增长，荧光信号也相应增长。5试验条件5.1生物安全要求所有培养物和废弃物的处置应符合GB19489规定。5.2防污染措施防止污染措施应符合GB/T27401规定。DB22/T3283—202126试剂或材料6.1M-MLV反转录酶，浓度为200U/μL，-20℃保存。6.2TaqDNA聚合酶，-20℃保存。6.3RNase抑制剂，浓度为40U/μL，-20℃保存。6.4Oligo...
