ICS11.220CCSB41DB22吉林省地方标准DB22/T3366—2022牛中华泰勒虫病检测PCR法PCRdetectionoftheileriasinensisinbovine2022-05-18发布2022-06-08实施吉林省市场监督管理厅发布DB22/T3366—2022I前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由吉林省畜牧业管理局提出并归口。本文件起草单位：延边大学、吉林省牧业信息中心、吉林省畜牧总站、长春市中小企业人才创业指导中心、延边朝鲜族自治州动物疫病预防控制中心、延边朝鲜族自治州畜牧总站。本文件主要起草人：贾立军、柴方红、王欣睿、王全利、陈健、王海军、梁晚枫、薛书江、陆秀娟、肖玉海。DB22/T3366—20221牛中华泰勒虫病检测PCR法1范围本文件规定了牛中华泰勒虫病PCR检测方法的试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤、结果判定和废弃物处理。本文件适用于牛中华泰勒虫核酸检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1中华泰勒虫病theileriasinensis中华泰勒虫(Theileriasinensis)寄生于牛的红细胞和白细胞中，以发热、贫血、黄疸及体表淋巴结肿大为典型症状的一种蜱传播性血液原虫病。4试剂或材料除另有规定，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682中一级水的要求。4.1试剂或材料4.1.1血液DNA提取试剂盒。4.1.2dNTP（dATP、dCTP、dGTP、dTTP）。4.1.3TaqDNA聚合酶。4.1.4DNAMarker分子量标准。4.1.550×TAE缓冲液见附录A.1。4.1.6加样缓冲液见附录A.2。4.1.710mg/mL溴化乙锭见附录A.3。4.1.81%琼脂凝胶见附录A.4。4.1.9阳性对照见附录A.5。DB22/T3366—202224.1.10阴性对照见附录A.6。4.1.11质粒DNA制备见附录B。4.1.12DNA凝胶回收试剂盒。4.1.13质粒DNA提取试剂盒。4.2引物PCR反应引物序列与浓度见表1。表1PCR反应引物序列与浓度引物引物序列参考序列长度bp浓度pmol/μLP15′-CACTGCTATGTTGTCCAAGAGATATT-3′P25′-AATGCGCCTAAAGATAGTAGAAAAC-3′GenBan（KX375400.1）887105仪器设备5.1PCR扩增仪，温度...
