ICS65.020.20CCSB31DB63青海省地方标准DB63/T1943—2021乐都紫皮大蒜脱毒繁育技术规范2021-08-18发布2021-09-20实施青海省市场监督管理局发布DB63/T1943—2021I前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由青海省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：青海大学。本文件主要起草人：梁健、洒威、王乐、王煜伟、殷恒霞、尙千涵、尹卫、岳苗、仲文祥、李小飞、王其才。本文件由青海省农业农村厅监督实施。DB63/T1943—20211乐都紫皮大蒜脱毒繁育技术规范1范围本文件规定了乐都紫皮大蒜脱毒繁育的培养基、外植体、接种、培养、病毒检测、驯化与培育等技术要求。本文件适用于乐都紫皮大蒜的脱毒繁育。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T405脱毒大蒜种蒜（苗）病毒检测技术规程3术语与定义下列术语和定义适用于本文件。3.1乐都紫皮大蒜（AlliumsativumL.）又名乐都红皮大蒜；系百合目，百合科，葱属，是青海优良地方品种。4培养基根据初代培养、增殖培养、分化培养、生根培养、诱导培养的营养需求配制培养基。培养基配制表见附录A。5外植体5.1外植体选取选取种性纯正、生长势强、具有代表性的乐都紫皮大蒜作为脱毒外植体进行田间标记，采收后的鳞茎于室温通风条件下单独保存。5.2外植体处理方法将鳞茎于0℃～5℃冰箱冷藏35d，打破休眠。6接种DB63/T1943—202126.1茎尖消毒选取无病斑的鳞茎，剥去外皮，自来水冲洗30min后，切取体积约1cm×1cm×1cm的茎尖。将茎尖转移至超净工作台内，75%的酒精消毒1min，蒸馏水冲洗3次～4次。再使用20%的次氯酸钠消毒10min，蒸馏水冲洗3次～4次。无菌滤纸吸干茎尖表面水分，置于无菌培养皿中备用。6.2茎尖剥离在40倍解剖镜下剥去茎尖幼叶，直至露出光滑茎尖，用解剖刀切取含茎尖的生长点2mm～3mm。6.3接种用手术镊将生长点移至初代培养基上，每个培养瓶接种4块~6块。酒精灯上烘烤瓶口和瓶盖，在培养瓶壁上注明产地、编号和接种日期等内容。7培养7.1培养条件培养温度24℃～26℃，光照强度2000Lx～3000Lx、每天光照14h～16h，相对湿度60%以上。7.2初代培养培养7d~12d，待茎尖形成嫩黄颗粒状愈伤组织。7.3增殖培养将愈伤组织转移至增殖培养基，培养14d，待形成直径3cm左右愈伤...
