中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２０５５—２００８豇豆重花叶病毒检疫鉴定方法犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犮狅狑狆犲犪狊犲狏犲狉犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊２００８０４２９发布２００８１１０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布前言本标准的附录Ａ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国北京出入境检验检疫局。本标准主要起草人：李桂芬、李明福、魏梅生、张永江、相宁、王金花。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２０５５—２００８豇豆重花叶病毒检疫鉴定方法１范围本标准规定了豇豆重花叶病毒检疫鉴定方法。本标准适用于可能带有豇豆重花叶病毒的进境种苗或繁殖材料的检疫和鉴定。２原理豇豆重花叶病毒学名：ｃｏｗｐｅａｓｅｖｅｒｅｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，缩写：ＣＰＳＭＶ。豇豆重花叶病毒的生物学、血清学特性是本标准制定的主要依据；该病毒的分类地位、寄主范围、病害症状、地理分布、传播途径、粒体形态等参见附录Ａ。３仪器和用具３．１仪器３．１．１酶标检测仪。３．１．２天平（０．００１ｇ）。３．１．３水浴锅。３．１．４隔离温室。３．２用具３．２．１可调移液器、可调移液器吸头。３．２．２酶联板。３．２．３Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管。３．２．４研钵。４检疫鉴定方法４．１豆类种子检测前的处理应将种子播种在经高温消毒过的土壤中，置隔离温室中培养并观察生长情况，待长有６片～８片真叶时进行检测。首先选择可疑病毒症状植株进行检测，同时也要随机抽取植株样品进行检测。４．２双抗体夹心酶联免疫吸附测定法４．２．１试材４．２．１．１酶联板使用质量有保障厂商生产的酶联板。４．２．１．２包被抗体特异性好的抗豇豆重花叶病毒抗体。４．２．１．３酶标抗体碱性磷酸酶标记的抗豇豆重花叶病毒抗体。４．２．１．４包被缓冲液（狆犎９．６）碳酸钠（Ｎａ２ＣＯ３）１．５９ｇ碳酸氢钠（ＮａＨＣＯ３）２．９３ｇ叠氮化钠（ＮａＮ３）０．２０ｇ１犛犖／犜２０５５—２００８用蒸馏水定容至１Ｌ，４℃储存。４．２．１．５洗涤缓冲液（犘犅犛犜、狆犎７．４）氯化钠（ＮａＣｌ）８．０ｇ磷酸二氢钾（ＫＨ２ＰＯ４）０．２ｇ磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４）１．１５ｇ氯化钾（ＫＣｌ）０．２ｇ吐温２０（Ｔｗｅｅｎ２０）０．５ｍＬ叠氮化钠（ＮａＮ３）０．２ｇ用...
