中国牛业科学2023，49(1):41-45ChinaCattleScience科学试验牛lncＲNAH19过表达载体构建刘晓军1，郝琴琴2，李鹏飞2*(1．山西省忻州市繁峙县金山铺乡综合便民服务中心，山西繁峙034300;2．山西农业大学生命科学学院，山西太谷030801)摘要:［目的］构建以及鉴定牛lncＲNAH19过表达重组载体，为进一步探究lncＲNAH19与miＲNA491和牛CAＲT基因的互作关系奠定试验基础。［方法］NCBI获取牛lncＲNAH19序列，经聚合酶链式反应(PCＲ)扩增，双酶切后载入pcDNA3．1－EGFP载体得到重组质粒。将pcDNA3．1－EGFP－H19、miＲNA491和CAＲT3种质粒共转染至HEK293T细胞，在细胞内反复扩增过表达之后，利用荧光定量技术检测pcDNA3．1－EGFP－H19的表达量。［结果］结果显示pcDNA3．1－EGFP－H19载体序列正确;293T细胞绿色荧光达50%，且强度适中，说明转染效果良好;lncＲNAH19在293T细胞中显著表达。［结论］pcDNA3．1－EGFP－H19载体构建成功，试验将为后续探究lncＲNAH19与miＲNA491和CAＲT基因之间的互作关系创造试验条件。关键词:pcDNA3．1－EGFP－H19;荧光定量技术;CAＲT;细胞转染中图分类号:Q782文献标识码:A文章编号:1001-9111(2023)01-0041-05收稿日期:2022-10-20修回日期:2022-12-06基金项目:山西省应用基础研究计划面上项目(20210302123380);山西农业大学校地合作项目(2021HX23，2022HX010);山西省现代农业产业技术体系建设专项作者简介:刘晓军(1990—)，男，大专，兽医师，主要从事畜牧管理和技术服务工作。*通讯作者:李鹏飞(1978—)，男，博士，教授，主要从事动物生殖生理方面的研究。0前言牛属于单胎动物，在发情周期中，只有一个优势卵泡能够发育成熟并排卵受精，其余从属卵泡将会闭锁停止发育［1］。可卡因—苯丙胺调节转录肽(co-caine-andamphetamineregulatedtranscriptpeptides，CAＲT)是一种下丘脑分泌的内源性神经肽，最早是在羊下丘脑中被发现的［2］。关于CAＲT的功能研究主要集中于CAＲT对激素内分泌的影响，CAＲT通过抑制雌激素分泌，在牛卵泡发育中发挥重要负调控作用。长链非编码ＲNA(longnon-codingＲNA，ln-cＲNA)序列长度在200nt以上，不具有编码蛋白的功能。近年来研究发现，lncＲNA在细胞生理活动中发挥着不可替代的调控作用，包括细胞增殖与凋亡、细胞分化、细胞衰老等。非编码ＲNA广泛参与雌性动物卵泡发育过程，其中MicroＲNAs(miＲNAs)和lncＲNA能够以内源性竞争ＲNA(competingendoge-nousＲNAs，ceＲNA)的形式参与基因调控。课题...
