第４４卷第２期家畜生态学报Ｖｏｌ．４４Ｎｏ．２２０２３年２月ＡｃｔａＥｃｏｌｏｇｉａｅＡｎｉｍａｌｉｓＤｏｍａｓｔｉｃｉＦｅｂ．２０２３■■■■■■■■■■■■■■科学研究鸡ｇｇａ－ｍｉＲ－１９９ａ慢病毒表达系统的构建［收稿日期］２０２１－０３－２９修改日期：２０２１－０６－２１［基金项目］陕西省重点研发计划（２０１９ＮＹ－０８４）［作者简介］董小琳（１９９５－），女，辽宁本溪人，在读硕士，研究方向：动物生物技术。Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｏｎｇｘｌ０８２０＠１６３．ｃｏｍ＊［通讯作者］魏泽辉（１９７２－），男，辽宁朝阳人，副教授，博士生导师，研究方向：动物生物技术。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｉｚｅｈｕｉ７８４８＠１６３．ｃｏｍ董小琳１，任远明２，薛剑楠１，王方１，魏泽辉１＊（１．西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌７１２１００；２．陕西省镇坪县畜牧兽医中心，陕西镇坪７２５６００）［摘要］为建立一种稳定持续表达鸡ｇｇａ－ｍｉＲ－１９９ａ的系统，将从鸡ＤＦ－１细胞扩增到的ｇｇａ－ｍｉＲ－１９９ａ前体序列克隆入ｐＬＬ３．７慢病毒载体质粒中用以包装慢病毒。同时构建了更换ｐＬＬ３．７质粒中鼠源Ｕ６启动子更换为鸡源及人源Ｕ６启动子的ｐＬＬ３．７慢病毒载体质粒；将其与慢病毒包装辅助质粒共转至ＨＥＫ２９３Ｔ细胞中，收集浓缩病毒颗粒并侵染细胞并获得过表达ｇｇａ－ｍｉＲ－１９９ａ的单细胞克隆。提取单细胞克隆总ＲＮＡ进行ｇｇａ－ｍｉＲ－１９９ａ－５Ｐ的定量检测。结果表明，经慢病毒侵染后的细胞中鸡ｇｇａ－ｍｉＲ－１９９ａ表达量显著提高，且人源Ｕ６启动子的转录效率最高，该研究成功建立了一种稳定持续表达鸡ｇｇａ－ｍｉＲ－１９９ａ的慢病毒系统，说明该系统有利于在鸡活体或原代细胞中开展ｍｉＲＮＡ功能的研究。［关键词］鸡；ｇｇａ－ｍｉＲ－１９９ａ；慢病毒；过表达［中图分类号］Ｓ８３１．２［文献标识码］Ａ［文章编号］１００５－５２２８（２０２３）０２－００１４－０５ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－１１８２．２０２３．０２．００３ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）在基因功能研究中起重要的作用，它是一类广泛存在于真核生物中的长度约２２ｎｔ的非编码ＲＮＡ。ｍｉＲＮＡ通过与被调控的ＤＮＡ或ＲＮＡ互补结合，从而对靶基因进行调控，在细胞分化、周期和凋亡的调控中具有重要功能［１］，并影响胚胎发育等生理学过程［２］...
