细胞融合与单克隆抗体细胞融合与单克隆抗体(kàngtǐ)(kàngtǐ)CellFusionandMonoclonalCellFusionandMonoclonalAntibodiesAntibodies第一页，共六十二页。4.1细胞融合4.2杂种细胞的遗传特性(tèxìng)和应用4.3淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体技术4.1细胞融合4.2杂种细胞的遗传特性(tèxìng)和应用4.3淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体技术第二页，共六十二页。4.1细胞融合4.11聚乙二醇介导的细胞融合4.12细胞电融合4.13杂种(zázhǒng)细胞的筛选第三页，共六十二页。4.14.1细胞融合细胞融合定义定义：指用自然或：指用自然或人工方法、使两个人工方法、使两个或更多个不同的细或更多个不同的细胞融合成一个细胞胞融合成一个细胞的过程，又称为的过程，又称为(ch(chēnɡwéi)ēnɡwéi)体细胞杂交体细胞杂交第四页，共六十二页。4.114.11聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）介导的细胞融合）介导的细胞融合原理：PEG带有大量的负电荷,和原生质体表面的负电荷在钙离子的连接下，形成静电键，促使异源的原生质体间的粘着和结合，在高pH,高钙离子的溶液的作用下，将钙离子和与质膜结合的PEG分子洗脱，导致电荷平衡失调(shītiáo)并重新分配，使两种原生质体上的正负电荷连接起来，进而形成具有共同质膜的融合体。第五页，共六十二页。影响影响(yǐngxiǎng)(yǐngxiǎng)因素：因素：分子量：400—6000（通常：1000—4000）浓度：20—60%（通常：30—50%）时间：悬浮法1—2min离心法5—8minpH：偏碱为宜（pH7.4—8.0）其他：二甲(èrjiǎ)亚砜、植物血凝素第六页，共六十二页。4.124.12细胞细胞(xìbāo)(xìbāo)电融合电融合原理：悬于大小不同的两平行电极间的低导电率溶液中的细胞，在1—100MHz和100—1000V/cm的交流电场中，会向小电极移动，并极化成偶极子，而沿电场方向发生(fāshēng)双向电泳，此时再加上适当强度和持续时间的高压电脉冲，即可使相邻细胞膜的接触区产生可逆电降解，从而触发细胞融合。第七页，共六十二页。双向电泳：在交流电场的作用下（1MHz，150V/cm）细胞(xìbāo)膜上正负电荷分离，产生偶极，两个极化的细胞(xìbāo)会发生相互的紧密接触。第八页，共六十二页。•可逆电降解(jiànɡjiě)：在高频电场的脉冲作用下（50ms，电场强度1.2－2kV/cm），细胞膜上的离子发生位移，而使电荷分开，细胞质膜产生电势，正、负电荷相互吸引，细胞膜变薄，随细胞势的增加，膜降解穿孔，形成微孔。•电场诱发的微孔面积和数目与...
