改良改良(gǎiliáng)(gǎiliáng)LowryLowry氏法测定蛋白质含氏法测定蛋白质含量量TheLowryMethodforProteinQuantitatioTheLowryMethodforProteinQuantitatiowww.ggene.cnwww.ggene.cn基因基因(jīyīn)(jīyīn)时代，为生命科学提供源动力！时代，为生命科学提供源动力！第一页，共八页。目的与要求：目的与要求：掌握改良掌握改良LowryLowry氏法测定蛋白质含量的氏法测定蛋白质含量的原理及方法；原理及方法；了解标准曲线在物质定量测定了解标准曲线在物质定量测定(cèdìng)(cèdìng)中的应用中的应用及绘图要点。及绘图要点。www.ggene.cnwww.ggene.cn基因时代，为生命科学提供基因时代，为生命科学提供(tígōng)(tígōng)源动力！源动力！第二页，共八页。实验原理实验原理：：在碱性条件下蛋白质的肽键与在碱性条件下蛋白质的肽键与CuCu2+2+螯螯合，形成蛋白质合，形成蛋白质--铜复合物。（双缩脲反应铜复合物。（双缩脲反应BiuretReactionBiuretReaction））蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸酚试剂中的磷钼酸--磷钨酸还原，生成钼蓝磷钨酸还原，生成钼蓝--钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度(nóngdù)(nóngdù)成正比成正比的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含量。（还原反应）量。（还原反应）www.ggene.cnwww.ggene.cn基因时代，为生命科学提供基因时代，为生命科学提供(tígōng)(tígōng)源动力！源动力！第三页，共八页。试剂试剂(mL)(mL)试管号试管号001122334455测定测定管管蛋白质标准蛋白质标准溶液溶液(0.20mg/(0.20mg/ml)ml)000.10.1000.20.2000.0.40400.60.6000.0.808011生理盐水生理盐水1.1.00000.90.9000.80.8000.0.60600.40.4000.0.202000试剂试剂AA0.0.90900.90.9000.90.9000.0.90900.90.9000.0.90900.90.900操作步骤操作步骤www.ggene.cnwww.ggene.cn基因时代，为生命科学提供基因时代，为生命科学提供(tígōng)(tígōng)源动力！源动力！第四页，共八页。混匀后置于混匀后置于3737度水浴度水浴1010分钟。分钟。冷却后各管加入试剂冷却后各管加入试剂B0.1mLB0.1mL，室温，室温(shì(shìwēn)wēn)放置放置1010分钟。分钟。各管接着加入试剂各管接着加入试剂C3mLC3mL，立即混匀...
