流式细胞术的原理(yuánlǐ)及应用无锡二院检验科第一页，共五十页。流式细胞术的基本概念流式细胞术(flowcytometry,FCM)是以流式细胞仪为检测手段，能够(nénggòu)快速、精确的对单个细胞或颗粒的物理和化学特性（如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等）进行多参数定量分析和分选的技术。第二页，共五十页。（1）流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及细胞器的结构及功能不被破坏的状态下，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化(chúnhuà)分选。（2）测量快速、大量、准确、灵敏、定量第三页，共五十页。细胞结构(jiégòu)•细胞大小•细胞颗粒度•DNA含量与细胞周期•RNA含量•蛋白质含量•……细胞功能·细胞表面(biǎomiàn)/胞浆/核的特异性抗原·细胞活性·细胞内/外的细胞因子·激素结合位点·细胞受体·钙离子浓度·线粒体膜电位·第四页，共五十页。采用激光作为激发光源，保证(bǎozhèng)其具有更好的单色性与激发效率；利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性；用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确性。第五页，共五十页。（1）液流系统(xìtǒng)（2）光学系统（3）数据处理系统第六页，共五十页。单细胞悬液大多数仪器检测范围是在50-300µm大小。将细胞悬液注射进入鞘液中这一过程,称为(chēnɡwéi)流体动力学聚焦第七页，共五十页。第八页，共五十页。由激光光源、分色反光镜、光束成形器、透镜(tòujìng)组、滤片和光电倍增管组成。FlowTipLaserSSandFLDetectorFSDetector第九页，共五十页。区别流式细胞仪光学显微镜光源激光自然光、灯光对象细胞、生物粒子细胞、组织等承载工具鞘液及流动室载玻片检测信号光学信号形态及染色放大方式PMT、放大电路目镜×物镜、光学放大统计计算机人工结果多参数，高通量综合分析简单，单参数第十页，共五十页。细胞在液柱中与激光束相交时向周围(zhōuwéi)360°立体角方向散射的光线信号，它的强弱与细胞的大小、形状、胞内颗粒折射等有关，主要分为前向散射光和侧向散射光。第十一页，共五十页。前向散射光（forwardscatter,FS）：激光束照射细胞(xìbāo)时，光以相对轴较小角度(0.5°～10°)向前方散射的讯号用于检测细胞等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。通常在FCM应用中，选取FS作阈值，来排除样品(yàngpǐn)中的各种碎片及鞘...
