实验室流式细胞仪单细胞分选技术(jìshù)第一页,共五十二页。流式细胞术(flowcytometry,FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速(kuàisù)、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。第二页,共五十二页。流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下,通过荧光探针的协助,从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析(dìngliàngfēnxī)或纯化分选。细胞不被破坏,测量快速、大量(dàliàng)、准确、灵敏、定量流式细胞术的特点(tèdiǎn)第三页,共五十二页。(1)液流系统(xìtǒng)(2)光学系统(3)数据处理系统1.流式细胞仪的基本(jīběn)结构:第四页,共五十二页。通过流式细胞仪进行(jìnxíng)细胞分选主要是在对具有某种特征的细胞需进一步培养和研究时进行(jìnxíng)的。细胞(xìbāo)分选原理第五页,共五十二页。细胞悬液形成液流柱流动室振动液流断裂成液滴空白液滴含细胞的液滴弃去偏转落入收集器压电晶体(jīngtǐ)产生(chǎnshēng)机械振动不充电(chōngdiàn)充电(一)分选基本原理第六页,共五十二页。•分选速度:单位时间内分选的细胞数量。与悬液中细胞的含量成正比。•分选纯度:分选出的目的细胞占所有收获细胞的百分率。•分选收获率:实际收获的分选细胞与设定通过(tōngguò)测量点的分选细胞之间的比率。与纯度成反比。•分选得率:从一群体细胞悬液中分辨出目的细胞的总量,再经分选后得到目的细胞的实际得率。与分选速度成反比。(二)分选的技术(jìshù)要求第七页,共五十二页。•参数:FS,SS,FL•数据显示方式(单参数直方图、双参数散点图、二维等高图、假三维等高图、三参数散点图)•设门分析(fēnxī)技术第二节数据(shùjù)的显示与分析第八页,共五十二页。FS:反映颗粒(kēlì)的大小SS:反映颗粒的内部结构复杂程度FL:反映颗粒被染上的荧光数量多少一、参数(cānshù)第九页,共五十二页。•单参数(cānshù)直方图•双参数直方图:点图二维等高图假三维等高图•三参数直方图•多参数分析直分析(fēnxī)方图设门分析(fēnxī):REGION和GATE设置二、数据显示方式第十页,共五十二页。由一维参数(散射光或荧光)与颗粒计数(COUNT)构成(gòuchéng),反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。(一)单参数(cānshù)直方图第十一页,共五十二页。单参数(cānshù)直方图细胞(xìbāo)相对数量第十二页,共五十二页。•双参数直方...