安徽农学通报2023年03期基因分子·生理生化·遗传育种·组织培养醇化烟叶附生产蛋白酶细菌分离筛选及活性评估梁伟1刘鸿1邹克兴1陈义昌1王小东2孙会忠2蔡联合1苏赞1胡逸超1（1广西中烟工业有限责任公司技术中心，广西南宁530000；2河南科技大学农学院，河南洛阳471023）摘要本文以醇化烟叶为材料，采用平板分离技术分离培养出26株细菌活体纯培养物，依次编号为GXZY1~GXZY26，纯化菌株通过牛奶琼脂培养基的鉴别培养，初筛出GXZY3、GXZY7和GXZY93株具有明显的水解圈，初步定性为产蛋白酶功能细菌。对GXZY3、GXZY7和GXZY9菌株连续60h的连续发酵实验，发现3株菌发酵液中的蛋白酶活性均呈现先高后低的变化规律，酶活性的最大值均出现在发酵后18h；GXZY9菌株发酵液中的酶活性持续保持高位，最大值达到18.2U/g，且酶活性下降幅度最小，而GXZY3和GXZY7则在发酵36h后持续下降到较低水平。对菌株GXZY13的多相鉴定结果表明，其隶属于芽孢杆菌属（Bacillus），命名为BacillussubtilisGXZY9。菌株GXZY9对烤烟蛋白质含量具有较强的调控功能，可作为烟叶醇化微生物制剂开发的良好备用菌株。关键词烟叶醇化；附生菌；蛋白酶；筛选中图分类号S47文献标识码A文章编号1007-7731（2023）03-0021-05Isolation,ScreeningandActivityEvaluationofProteaseProducingBacteriafromAlcoholizedTobaccoLeavesLIANGWei1LIUHong1ZOUKexing1CHENYichang1WANGXiaodong2SUNHuizhong2CAILianhe1SUZan1HUYichao1（1TechnicalCenterofGuangxiChinaTobaccoIndustryCo.,Ltd.,NanningGuangxi530000;2CollegeofAgriculture,HenanUniversityofScienceandTechnology,LuoyangHenan471023）AbstractTwenty-sixstrainsofpurebacteriainvivowereisolatedandculturedfromalcoholizedtobaccoleafbyplateseparationtechnology,whichwerenumberedGXZY1-GXZY26.ThepurifiedstrainswereidentifiedbymilkAGARmediumandGXZY3,GXZY7andGXZY9hadobvioushydrolyticcircles,andwerepreliminarilyidentifiedasprotease-producingfunctionalbacteria.TheproteaseactivityofGXZY3,GXZY7andGXZY9strainsinthefermentationbrothofGXZY3,GXZY7andGXZY9strainsincreasedatfirstandthendecreased,andthemaximumvalueofenzymeactivityoccurredat18hafterfermentation.TheenzymeactivityinthefermentationbrothofGXZY9strainremainedhigh,reachingthemaximumvalueof18.2U/g,andtheenzymeactivitydecreasedtheleast,whileth...
