贵州农业科学ＧｕｉｚｈｏｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ２０２３，５１（３）：８２～８８ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｚｎｙｋｘ．ｏｒｇ．ｃｎＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－３６０１．２０２３．０３．０１１收稿日期：２０２２－１２－１４基金项目：福建省自然科学基金项目（２０２０Ｊ０１１８１）作者简介：林涛（１９９８－），男，在读硕士，研究方向：生物技术。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｔ１８７５９２７２７１０＠１６３．ｃｏｍ＊通讯作者：张怀东（１９８２－），男，副研究员，博士，从事病毒学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｈｕａｉｄｏｎｇ＠ｆｊｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ刘峰（１９６４－），男，副教授，硕士，从事工业微生物研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｆｅｎｇ＠ｆｊｎｕ．ｅｄｕ．ｅｎ基于Ｅ１６５Ｒ基因非洲猪瘟ＬＡＭＰ快速检测方法的建立林涛１，陈珺煜１，王成龙１，李芹１，２，张怀东１，２＊，刘峰１，２＊（１．福建师范大学生命科学学院，福建福州３５０１１７；２．工业微生物发酵技术国家地方联合工程研究中心，福建福州３５０１１７）摘要：【目的】建立特异性好、灵敏度高的非洲猪瘟病毒（Ａｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ，ＡＳＦＶ）环介导等温扩增（Ｌｏｏｐ－ＭｅｄｉａｔｅｄＩｓｏｔｈｅｒｍａｌＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＬＡＭＰ）快速检测方法，为非洲猪瘟的实时实地快速检测提供参考。【方法】通过对非洲猪瘟病毒多种基因型６６个毒株的Ｅ１６５Ｒ基因多序列比对，选取相对保守区域设计ＬＡＭＰ引物，并对反应条件及反应体系进行优化。在获得的最优反应条件及体系下考察方法的检测特异性和灵敏性。【结果】选取的ＬＡＭＰ检测靶标２３５ｂｐ（２９～２６４ｂｐ）在不同基因型ＡＳＦＶ毒株中保守性较好，序列相似度达９４．４６％～１００％；ＬＡＭＰ反应的最佳温度为６４℃、时间为３５ｍｉｎ、Ｍｇ２＋浓度为８ｍｍｏｌ／Ｌ、内外引物比为８︰１、ＢｓｔＤＮＡ聚合酶量为１６Ｕ。建立的ＡＳＦＶ环介导等温扩增检测方法最低检测限为５０ｃｏｐｉｅｓ／μＬ，较常规ＰＣＲ检测提高１个数量级，且３５ｍｉｎ即可完成扩增反应。ＬＡＭＰ检测方法与猪圆环病毒２型（ＰＣＶ２）、伪狂犬病毒（ＰＲＶ）、猪繁殖与呼吸道综合症病毒（ＰＲＲＳＶ）和猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）４种临床症状类似的猪病毒感染性疫病没有交叉反应。【结论】基于该新检测靶点的ＡＳＦＶＬＡＭＰ检...
