16xperimentalstudyononlineE实验研究抗抑制素α纳米抗体真核表达载体的构建贾昊天，马继福，吾热力哈孜·哈孜汗★（石河子大学动物科技学院832000）摘要：为探究抗抑制素α纳米抗体在动物繁殖方面的功能，本实验使用本实验室筛选出的高特异性抗抑制素α纳米抗体（Nb4）基因，对其进行真核表达载体的构建，以期能为解决普通抑制素α免疫制剂产量不足和免疫原性较差的问题，更希望为提高绵羊繁殖力做出贡献。关键词：纳米抗体；抑制素α；真核表达抑制素主要是由性腺所分泌的一种糖蛋白激素，抑制素有两种类型（抑制素A和抑制素B），两者具有相同的α-亚基，而β-亚基因N-端氨基酸序列的差异而分为βA和βB，α-亚基和βA、βB通过二硫键连接分别形成抑制素A和抑制素B[1]。抑制素A和抑制素B具有相似的生物活性，均可选择择性地抑制SH的合成与分泌，从而降低血液中的FSH水平[2]。其中α-亚基上有两个Ｎ端连接的糖基化位点，被认为是抑制素发挥生物学功能的活性中心，已有研究表明抑制素在卵泡生长、发育、闭锁和排卵过程中起重要作用[3-4]，此外国内外大量研究人员利用抑制素α（INHα）免疫来提高动物机体FSH水平，且有文献证明INHα基因免疫不仅可以提高动物体内FSH水平，还可以提高排卵率和产仔数[5-8]。但由于目前所产生的INHα免疫制剂（INHα抗原和INHα抗体）由于产量低和免疫原性较差的问题，很难进行推广使用。重链抗体（HCAb）是在驼类动物血清中发现的一种特殊IgG，因其天然缺失轻链和第一恒定区（CHⅠ），所以被称为重链抗体。重链抗体的N端区域为抗原结合结构域（VHH），也被称为纳米抗体，与常规抗体中的Fab片段相比，VHH就是功能和结构片段。纳米抗体分子结构的特殊性，使其具备了传统抗体不具备的优势：即分子量小、免疫原性低、易于表达、组织穿透力强[9]、稳定性强[10]、高抗原结合力。此外纳米抗体能够通过血脑屏障并迁移到中枢神经系统的组织中[11]，这使得纳米抗体具有很强的使用价值，在许多方面可替代普通抗体，弥补普通抗体的不足。1材料与方法1.1材料1.1.1菌株及载体DH5α感受态细胞购自北京索莱宝科技有限公司；克隆载体pMD19-T购自TaKaRa公司；真核表达载体PcDNA3.1由新疆生产建设兵团绿洲生态实验室保存；抗抑制素α纳米抗体（Nb4）基因为本课题组利用噬菌体展示技术从前期构建的抗抑制素α纳米抗体文库中淘选获得。1.1.2主要试剂限制性核酸内切酶EcoRI和HindIII、胰蛋白胨、琼脂粉购自TaKaRa公司；质粒小提试剂盒、DNA...
