第44卷第1期温州大学学报（自然科学版）2023年2月Vol.44No.1JournalofWenzhouUniversity(NaturalScienceEdition)Feb.2023克雷伯氏菌中群体淬灭基因kplD6的克隆表达与酶学特性分析刘栋，赵一竹，杨惠婷，李亚茹，董新姣†(温州大学生命与环境科学学院，浙江温州325035)摘要：群体淬灭酶是一类阻碍细菌间群体感应交流机制的重要物质，可以使信号分子降解或失活，从而阻止群体感应交流，进而破坏微生物多种行为和活动．前期研究中发现Klebsiellasp.Q2是具有群体淬灭能力的细菌，对其进行基因组测序分析后，选取该菌株中一个预测具有群体淬灭功能的基因（命名为kplD6）作为研究对象，进行基因克隆、异源表达、蛋白纯化、结构预测、活性检测和酶学特性分析．结果表明，kplD6基因全长1080bp，编码蛋白质由334个氨基酸组成，相对分子质量37kDa，理论等电点为5.25，是一种具有TIM-barrel结构的磷酸三酯酶类内酯酶，最适pH为7，最适温度为45℃，Mn2+和Co2+等金属离子可以显著增强该酶活性．这对阐明Q2菌的群体淬灭功能的分子调控机制提供了更多信息．关键词：群体淬灭；克雷伯氏菌；kplD6；基因表达；磷酸三酯酶类内酯酶中图分类号：Q936文献标志码：A文章编号：1674-3563(2023)01-0044-10DOI：10.3875/j.issn.1674-3563.2023.01.006本文的PDF文件可以从https://xbzk.wzu.edu.cn获得群体感应（QuorumSensing，QS）是一种细胞与细胞之间的交流过程[1]，使细菌能够获取周围环境中的菌体密度和菌种组成等信息，并据此调整自身的基因表达[2]．群体淬灭（QuorumQuenching，QQ）是一种阻止群体感应过程的机制[3]，被认为是由发出QS信号的生物体为回收或清除自身的QS信号而进化的一种自然机制，或者是QQ菌在与发出QS信号的细菌在相互竞争的背景下进化而来的一种机制[3]．这一作用可以阻止微生物形成生物膜，有效干扰这些微生物进行聚集性活动的能力．群体淬灭作用主要表现在干扰信号分子合成、使信号分子失活或降解、阻止信号分子与受体蛋白结合、抑制其转录调节功能等方面[4-7]．目前已经发现或研制了一系列的群体感应抑制剂[8-9]、群体淬灭菌与群体淬灭酶[10]．群体淬灭酶是从群体淬灭菌中发现的具有降解信号分子能力的酶类，由于发现或合成一种可以抑制大多数信号分子的抑制剂十分困难，因此对群体淬灭的研究热点转向了更加经济、环保、适应性更广的群体淬灭酶．群体淬灭酶能利用群体感应中的信号分子N-酰基高丝氨酸内脂（AcylHomoserineLactone，AHL）作为底物...
