山东医药2023年第63卷第8期靶向CD19的CAR-NK92细胞构建及其对相关肿瘤细胞的杀伤作用观察董宇曦，余卓营，冯义超，王建勋北京中医药大学生命科学学院，北京102488摘要：目的构建靶向分化群抗原19（CD19）的嵌合抗原受体（CAR）-NK92细胞，并观察其对相关肿瘤细胞的杀伤作用。方法用XhoI/NotI限制性内切酶将靶向CD19的单链抗体序列与pMFG逆转录病毒载体进行双酶切，回收纯化片段后用连接酶进行连接，构建CAR001、CAR002质粒，进行NK92细胞的转导和逆转录病毒载体的包装，构建靶向CD19的CAR-NK92细胞，分别为CAR001-NK92细胞、CAR002-NK92细胞。构建表达CD19抗原的Raji-luc、SW620-EGFP、RPMI-hCD19-copGFP细胞。分别将NK92细胞、CAR001-NK92细胞、CAR002-NK92细胞与表达CD19抗原的肿瘤细胞共培养，分别采用流式细胞术（靶细胞为RPMI-hCD19-copGFP细胞）、荧光素酶报告基因法（靶细胞为Raji-luc细胞）和IncuCyte法（靶细胞为SW620-EGFP细胞）观察CAR-NK92细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，采用流式细胞术观察CAR-NK92细胞对Daudi细胞增殖的影响。结果CAR001-NK92细胞、CAR002-NK92细胞的CAR表达率分别为99.0%、98.4%，CD19抗原表达率分别为99.6%、99.3%，成功构建靶向CD19的CAR-NK92细胞。Daudi、Raji-luc、SW620-EGFP、RPMI-hCD19-copGFP细胞的CD19抗原表达率分别为99.0%、100%、100%、99.5%，表达CD19抗原的肿瘤细胞构建成功。NK92细胞、CAR001-NK92细胞、CAR002-NK92细胞在不同效靶比下对RPMI-hCD19-copGFP细胞和SW620-EGFP细胞的杀伤效率依次增高（P均<0.05）。CAR002-NK92细胞在不同效靶比下对Raji-luc细胞的杀伤效率均高于CAR001-NK92细胞（P均<0.01）。NK92组和CAR002-NK92组细胞增殖能力低于CAR001-NK92组（P均<0.05）。结论成功构建的靶向CD19的CAR-NK92细胞，其对多种表达CD19抗原的肿瘤细胞具有明显的杀伤作用。关键词：CD19抗原；嵌合抗原受体；NK92细胞；肿瘤细胞doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.08.003中图分类号：R73文献标志码：A文章编号：1002-266X（2023）08-0011-05ConstructionofCAR-NK92cellstargetingCD19anditscytotoxicityagainsttumorcellsDONGYuxi，YUZhuoying，FENGYichao，WANGJianxunSchoolofLifeSciences，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing102488，ChinaAbstract：ObjectiveToconstructthechimericantigenreceptor（CAR）-NK92cellstargeting（clusterofdifferenti⁃ation19）CD19andtoobservethekillingef...
