【脑源性神经生长因子基因体外转染鼠雪旺细胞的生物活性】重组人表皮生长因子凝胶[]目的探讨应用重组腺病毒载体携带脑源性神经生长因子〔BDNF〕基因转染雪旺细胞〔SCs〕的可行性及促进外周神经损伤恢复的有效途径。方法采取6～7天SD乳鼠坐骨神经，利用酶消化法、差速贴壁法别离获得雪旺细胞，阿糖胞苷与Geneticin联合应用纯化、BPE促进雪旺细胞增殖，获取大量高纯度的雪旺细胞。使用含BDNF基因的重组腺病毒〔Ad-BDNF〕，经不同感染复数〔MOI〕病毒量感染体外培养的大鼠源性SCs。逆转录聚合酶链反响〔RT-PCR〕检测感染后72h的BDNFmRNA，ELISA定量分析感染后3d、6d、9d、12d、15d、18d和21d时感染后SCs培养液上清中BDNF的表达。关键词：雪旺细胞基因转染脑源性神经生长因子中图分类号：R329.28文献标志码：B文章编号：1004-7484〔2023〕12-0029-03脑源性神经生长因子〔BDNF〕是一种重要的神经营养因子，能够促进创伤后神经的修复与再生和减少神经元的死亡[2]。本研究通过将携带有BDNF基因的重组腺病毒表达载体转染体外培养的雪旺细胞，以检测BDNF基因的调控表达情况。探索基因治疗外周神经损伤的新途径，为进一步临床应用治疗基因通过腺病毒载体转染雪旺细胞促进周围神经损伤修复奠定实验根底。1材料与方法1.1材料倒置相差显微镜；光学显微镜；CO2孵箱；超净工作台；高速冷冻离心机；DUR530核酸蛋白分析仪；PCR仪；微型垂直平板电泳槽及电转移系统；凝胶成像分析系统；酶标仪；DMEM培养液；山羊抗S-100多克隆抗体；兔抗BDNF多克隆抗体；HRP标记的兔抗山羊IgG抗体；HRP标记的山羊抗兔IgG抗体；DAB显色剂；总RNA提取试剂盒；RT-PCR反响试剂盒；DNAMarkerDL2000；硝酸纤维素膜；胎牛血清；胰蛋白酶；Ⅰ型胶原酶；阿糖胞苷；多聚赖氨酸；Geneticin；牛脑垂体提取物；SABC试剂盒；兔抗S-100单抗；ECL试剂；鼠BDNF蛋白ELISA试剂盒。1.2方法1.2.1SCs别离培养取出生6～7天的SD小鼠，由第四军医大学实验动物中心提供，常规引颈处死、消毒，取其两侧坐骨神经，采用0.25%胰蛋白酶与0.15%的Ⅰ型胶原酶混合消化，消化完全后含血清培养液中和、离心，行双30min差速贴壁法两次后接种于预铺有多聚赖氨酸的培养瓶内，37℃、5%CO2孵箱中进行培养。阿糖胞苷与Geneticin进行纯化[3，4]，牛脑垂体提取物〔BPE，100µg/ml〕促进SCs增殖。待细胞80%融合时准备病毒转染。1.2.2Ad-BDNF转染雪旺细胞含BDNF基因的重组腺病毒〔Ad-BDNF〕购自中国军事医学科学院根底医学研究所。在...
