葫芦巴种子提取物对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响黄小蕾孙明振摘要：目的：探讨不同溶剂萃取葫芦巴乙醇提取液对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响。方法：利用MTT法检测葫芦巴乙醇提取物各层萃取物对MCF-7细胞的抑制作用，TUNEL法检测对MCF-7细胞凋亡的影响。结果：高浓度〔100μg/ml〕萃取物对MCF-7有一定的抑制作用，其中正丁醇层萃取物抑制作用最强〔77.65±0.57〕，凋亡率比对照组增加64.12%。结论：葫芦巴乙醇提取物正丁醇萃取物有诱导MCF-7细胞凋亡的作用。关键词：葫芦巴种子;提取物;乳腺癌;影响乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，已经成为女性健康的最大威胁。常规化疗药物的毒副作用和多药耐药性是成为化疗失败的主要原因。中草药提取物在治疗肺癌及减毒增效方面开展迅速，在治疗肺癌方面有着巨大潜力。葫芦巴为豆科葫芦巴属植物，是世界上最早的药用植物之一。目前对葫芦巴的研究已经说明其具有抗氧化[1]、抗糖尿病[2]、降胆固醇[3]、抗生育[4]、抗免疫、抗肿瘤[5]等作用。本实验报道葫芦巴种子醇提取物对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响。1材料1.1细胞人乳腺癌MCF-7细胞株，购于广州吉妮欧生物科技。1.2药物与试剂葫芦巴〔Trigonellafoenum-graecumL.〕购置于国药控股漯河，经鉴定为豆科植物蒙古葫芦巴的枯燥根。MTT、碧云天TUNEL细胞凋亡检测试剂盒，购于郑州天驰生物。2实验方法2.1药物制备取枯燥的葫芦巴药材100g，粉碎至适宜粒度，用1000mL75%乙醇渗漉提取，提取液减压浓缩至无醇味，加水分散至100mL制成水混悬液。分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分取有机层，得到4个局部：Ⅰ〔石油醚层〕、Ⅱ〔乙酸乙酯层〕、Ⅲ〔正丁醇层〕、Ⅳ〔水层局部〕。将提取的各个局局部别减压回收溶剂至干，加适量95%乙醇溶解，再加蒸馏水稀释〔乙醇终浓度≤1.5%〕制成实验所需浓度的混悬液。2.2细胞培养将乳腺癌MCF-7细胞置于恒温培养箱中〔CO2浓度：5%，T：37℃〕，用RMPI1640完全培养液〔含10%胎牛血清和1%双抗〕培养，每天换液一次，换液前观察细胞生长情况，平均2天传代一次〔观察细胞贴壁生长至培养瓶的80%-90%左右即可传代〕。传代方法：除去培养瓶中的培养液，用PBS液冲洗2-3遍后参加0.25%胰蛋白酶0.8ml，消化3-4分钟，待消化完全后〔细胞间隙变大，形状变圆即为消化完全〕，立即参加RMPI164培养液终止消化，轻柔吹打贴壁细胞使其充分脱落后分装，放入恒温培养箱中继续培养。2.3MTT检测法收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，细胞培养版96孔板每孔参加100ul...
