显微镜血球计数板计数法一、实验目的1、明确显微镜计数的原理。2．学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。二、实验材料酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管、吸水纸等。三、实验原理利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0.1㎜3），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，共400小格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，总共也是400小格。所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的。每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积为1㎜2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1㎜，所以计数室的容积为0.1㎜3。推导：1mm×1mm方格的计数1mm×1mm表示计数室的边长，即一个大方格的边长。由于计数室厚度为0.1mm，所以计数室的总体积为0.1mm3。1．16×25型的计数公式：酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/100×400×10000×稀释倍数2．25×16型的计数公式：酵母细胞个数／1mL＝80个小方格细胞总数/80×400×10000×稀释倍数假设：计数室内酵母菌为a个，稀释倍数为b，则10mL培养液中酵母菌总数为：a×105×b例4、通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先▲后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有▲个。（参考答案：稀释；2×108）5×400×10000×10＝2×108。例6、在用血球计数板（2mm×2mm方格）对某一稀释50倍样品进行计数时，发现在一个计数室内（盖玻片下的培养液厚度为0.1mm）酵母菌平均数为16个，据此估算10mL培养液中有酵母菌▲个。（参考答案：2×107）四、操作过程1．稀释将酵母菌悬液进行...
