1燕德起2血清总胆红素和结合胆红素测定改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素胆红素氧化酶法测定总胆红素和结合胆红素3改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素【原理】血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素；非结合胆红素须有加速剂咖啡因-苯甲酸钠-醋酸钠作用，其分子内氢键破坏后才能与重氮试剂反应，也产生偶氮胆红素。本法重氮反应pH6.5，最后加入碱性酒石酸钠使紫色偶氮胆红素(吸收峰530nm)转变成蓝色偶氮胆红素，在600nm波长比色，使检测灵敏度提高。4改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素【试剂】1．咖啡因-苯甲酸钠试剂称取无水醋酸钠41.0g，苯甲酸钠38.0g，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)0.5g，溶于约500ml去离子水中，再加入咖啡因25.0g，搅拌使溶解(加入咖啡因后不能加热溶解)，用去离子水补足至1L,混匀。滤纸过滤，置棕色瓶，室温保存。2．碱性酒石酸钠溶液称取氢氧化钠75.0g，酒石酸钠(Na2C4H4O6?2H2O)263.0g，用去离子水溶解并补足至1L，混匀。置塑料瓶中，室温保存。3．72.5mmol/L亚硝酸钠溶液称取亚硝酸钠5.0g，用去离子水溶解并定容至100ml，混匀，置棕色瓶，冰箱保存，稳定期不少于3个月。作10倍稀释成72.5mmol/L，冰箱保存，稳定期不少于2周。4．28.9mmol/L对氨基苯磺酸溶液称取对氨基苯磺酸(NH2C6H4SO3H?H2O)5.0g，溶于800ml去离子水中，加入浓盐酸15ml，用去离子水补足至1L。5．重氮试剂临用前取上述亚硝酸钠溶液0.5ml和对氨基苯磺酸溶液20ml，混匀即成。6．5.0g/L叠氮钠溶液。5改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素【试剂】7．胆红素标准液•(1)目前一般用游非结合胆红素配制标准液，此标准品须用含白蛋白的溶剂配制，常用人混合血清，对此血清的要求如下：•收集无溶血、无黄疽、无脂浊的新鲜血清，混合，必要时可用滤菌器过滤。取过滤后的血清1ml，加入新鲜0.154mmol/LNaCl溶液24ml，混合。在414nm波长，1cm光径，以0.154mmol/LNaCl溶液调零点，其吸光度应小于0.100；在460nm的吸光度应小于0.04。•(2)配制标准液的胆红素须符合下列标准：纯胆红素的氯仿溶液，在25℃条件下，光径1.000±0.001cm，波长453nm，摩尔吸光系数应在60700±1600范围内；改良J-G法偶氮胆红素的摩尔吸光系数应在74380±866。•(3)胆红素标准贮存液(171μmol/L)准确称取符合要求的胆红素10mg，加入二甲亚砜1ml，用玻璃棒搅拌，使成混悬液。加入0.05mol/L碳酸钠溶液2ml，使胆红素完全溶解后，移入100ml容量瓶中，以稀释用血清...
