动物细胞工程其中,动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞工程常用的技术手段动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合生产单克隆抗体烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对于大面积烧伤病人来讲,健康皮肤很有限,请同学们想一想如何来治疗该病人?思考?取该患者的皮肤进行细胞培养,获得人造皮肤后再移植。(一)、概念是指从动物机体内取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。(二)、原理细胞分裂增殖一、动物细胞培养(三)、动物细胞培养过程取动物组织块剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础剪碎组织及胰蛋白酶处理的目的?剪碎组织及胰蛋白酶处理的目的:将组织分散成单个细胞,有利于细胞与培养液充分接触,便于培养。制成细胞悬液动物胚胎或幼龄动物器官因为这些组织或器官,分裂能力旺盛,易于培养。(四)动物细胞生长特性1.细胞贴壁:细胞悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。要求:培养瓶或培养皿的内表面光滑无毒、易于贴附。2.接触抑制接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。50代以后失去接触抑制接触抑制(细胞为单层)50代以后细胞失去接触抑制原代培养:人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。传代培养:贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续培养,让细胞继续增殖。这样的培养过程通常被称为传代培养。培养过程:培养过程:动物胚胎或幼龄动物的细胞、组织或器官细胞悬浮液→原代培养传代培养10代细胞50代细胞无限传代单个细胞胰蛋白酶加培养液剪碎细胞贴壁剥离分瓶部分细胞的细胞核型发生变化动物细胞培养最终不能培养成动物体接触抑制培养器皿超净工作台实验设备细胞培养箱倒置显微镜(五)、动物细胞培养条件1、无菌、无毒的环境(①添加一定量的抗生素;②定期更换培养液)2、营养(葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等)3、温度和PH温度36.5+0.5度,pH7.2~7.44、气体环境O2和CO2(95%空气和5%CO2)(使用合成培养基时,需加入血清、血浆等)补充合成培养基中缺乏的物质,如血清激素、氨基酸等。CO2有调节PH的作用。思考与讨论1、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗?2、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?...